Đánh giá về Đặc điểm proteinase K, hoạt động enzyme và ứng dụng / Sinh học
Xem nhanh
các proteinase K là một enzyme thuộc nhóm protease serine, nghĩa là, nó có ở trung tâm xúc tác hoạt động của nó là một serine axit amin và có chức năng phá vỡ các liên kết peptide bằng cách thủy phân. Đổi lại, enzyme này thuộc họ protein Subilisin (peptidase S8).
Proteinase K có khối lượng phân tử ( MW ) là
28.900 dalton và được phân lập lần tiên phong vào năm 1974 từ chiết
xuất của nấm Album Engyodontium, trước đây được biết đến với tên
của Album Tritirachium Limber.
Nó thể hiện khả năng phân giải protein cao, được chứng minh là có thể làm giảm chất keratin có trong tóc. Từ keratin trong tiếng Anh được viết là “keratin”, do đó nó được gọi là “proteinase K”.
Do năng lực cao để tách protein địa phương, enzyme này rất có ích trong những kỹ thuật sinh học phân tử khác nhau. Nó đa phần được sử dụng để cô lập và điều chế axit nucleic có khối lượng phân tử cao ( MW ) .Proteinase K hoạt động giải trí bằng cách giải phóng DNA hạt nhân, đồng thời hủy hoại protein và làm bất hoạt RNase và DNase, nghĩa là vô hiệu những nuclease trong chế phẩm DNA và RNA. .Mặt khác, người ta đã thấy rằng proteinase K hoàn toàn có thể thủy phân một số ít protein địa phương bị biến tính, điều này đã làm dấy lên sự chăm sóc của những nhà nghiên cứu về việc sử dụng nó trong nghiên cứu và điều tra về protein prion ( PrPC ) .Tuy nhiên, mặc dầu năng lực phân giải protein cao, vẫn có những protein kháng lại tính năng của proteinase K. Trong số này, có 1 số ít protein không bình thường được gọi là prion ( PrPSc ), tương quan đến bệnh não xốp dạng xốp truyền .Chỉ số
- 1 Đặc điểm của proteinase K
- 2 hoạt động enzyme
- 3 ứng dụng
- 4 Ưu điểm của proteinase K
- 5 protein kháng proteinase K
- 6 tài liệu tham khảo
Đặc điểm của proteinase K
Proteinase K có một cấu trúc ĐH gồm có ba lớp, với một tấm β inmiscuidas Bảy chuỗi giữa hai lớp xoắn. Thuộc về mái ấm gia đình của peptidase S8 được đặc trưng bởi vị trí hoạt động giải trí của mình trong một bộ ba xúc tác, có thứ tự tuần tự là ( Asp, Ngài và Ser ), mà phân biệt chúng từ những mái ấm gia đình peptidase khác. Enzyme này từ nhóm protease serine được đặc trưng bằng cách thủy phân những link peptide gần với nhóm carboxylic của axit amin aliphatic và thơm .Mặt khác, nó hoàn toàn có thể hoạt động giải trí với sự xuất hiện của một số ít chất ăn mòn, ví dụ điển hình như natri dodecyl sulfate ( SDS ), Tris-HCL và EDTA, được sử dụng để giúp làm biến tính protein, khiến chúng mất cấu trúc tự nhiên .Đây là bước tiên phong trong quy trình chuẩn bị sẵn sàng protein cho kỹ thuật điện di. Phạm vi pH mà tại đó proteinase K hoạt động giải trí khá rộng ( 2.0 đến 12.0 ), với độ pH tối ưu trong khoảng chừng từ 7.5 đến 12.0 và điểm đẳng điện của nó là 8,9. Như hoàn toàn có thể thấy, nó hoạt động giải trí chống lại khoanh vùng phạm vi pH rất rộng .Một đặc thù khác điển hình nổi bật trong proteinase K là tính không thay đổi của nó khi có nhiệt độ cao ( 50 – 60 ° C ) .
Hoạt động men
Proteinase K cần sự hiện hữu của ion canxi, mặc dầu điều này không tác động ảnh hưởng đến hoạt động giải trí của nó, nếu thiết yếu để duy trì sự không thay đổi của nó .Để proteinase K thực thi quy trình tiêu hóa trọn vẹn cơ chất, cần có thời hạn tiếp xúc gần đúng trong khoảng chừng từ 5 phút đến 2 giờ .Tuy nhiên, theo nghĩa này, Daza và tập sự đã so sánh độ tinh khiết của DNA thu được ở nhiều lần tiếp xúc với proteinase K và Tóm lại rằng việc ủ bệnh lê dài ( lên đến 24 giờ ) giúp cải tổ đáng kể chất lượng DNA .Bây giờ, tương quan đến nồng độ được sử dụng của enzyme proteinase K trong những giao thức khác nhau, hoàn toàn có thể nói rằng nó rất phong phú .
Nó có thể được sử dụng từ nồng độ rất thấp (5 g / ml) đến nồng độ 500 g / ml. Nhưng nồng độ công việc thường xuyên nhất nằm trong khoảng từ 50-100μg / ml, đặc biệt đối với quá trình tiêu hóa protein và bất hoạt nuclease. Mặc dù nồng độ 2 mg / ml là cần thiết để điều trị mô.
Ứng dụng
Các ứng dụng của nó rất rộng và hoàn toàn có thể được tóm tắt như sau :- Nó được sử dụng trong tiêu hóa protein và chiết xuất DNA bằng 1 số ít giải pháp như : khử muối, PK-SDS, cetyl-trimethyl ammonium bromide ( CTAB ), kali axetat biến hóa và chiết xuất bằng natri iodua ..- Bất hoạt những nuclease ( RNase và DNase ). – Trong kỹ thuật lai tại chỗ ( NGÀI ), để giúp giải phóng axit nucleic, ngoài việc vô hiệu những protein không mong ước .- Điều chỉnh protein .- Ở Lever nghiên cứu và điều tra, trong những điều tra và nghiên cứu khác nhau .
Ưu điểm của proteinase K
Đã có nhiều điều tra và nghiên cứu so sánh những kỹ thuật tách chiết DNA sử dụng proteinase K, với những người khác không được sử dụng và tổng thể những Tóm lại rằng có là lớn nhất khi enzyme được sử dụng. Trong số những lợi thế tất cả chúng ta hoàn toàn có thể kể đến như sau :- DNA khối lượng phân tử cao có chất lượng cao và độ tinh khiết thu được .- DNA chiết xuất không thay đổi đến 3 tháng .DNA chiết xuất hoàn toàn có thể được sử dụng trong những kỹ thuật sau : Nam blot, phản ứng chuỗi polymerase ( PCR ), điện di, trong số những kỹ thuật khác.
Protein kháng proteinase K
Các cuộc tìm hiểu khác nhau đã Kết luận rằng prion ( protein ô nhiễm PrPSc không bình thường ) được phân biệt với protein PrPC ( địa phương ) vì chúng chống lại tác động ảnh hưởng của proteinase K, trong khi PrPC nhạy cảm với hành vi của chúng .Các tác giả khác đã miêu tả rằng trong cấu trúc của PrPSc có những phần nhạy cảm và những phần khác kháng với proteinase K. Tuy nhiên, cả hai phần đều ô nhiễm và nhiễm trùng như nhau ..Mặt khác, Bastian và cộng tác viên năm 1987 đã phân lập 4 protein gồm 28, 30, 66 và 76 kda từ một loài Spiroplasma mirum. Tất cả đều kháng lại công dụng của proteinase K và cũng có phản ứng chéo với một số ít prion .
Được biết, loài này có thể gây đục thủy tinh thể và tổn thương thần kinh quan trọng và do những phát hiện khoa học của Bastian, trong số các nghiên cứu khác, một nỗ lực đã được thực hiện để liên kết vi sinh vật này với bệnh não xốp truyền bệnh.
Tuy nhiên, nguyên do của bệnh lý thần kinh thoái hóa này vẫn được quy cho prion ngày này .Theo nghĩa này, Butler và cộng tác viên vào năm 1991 đã xác lập và miêu tả một lớp protein K kháng protein 40 Kda từ hai chủng Mycoplasma hyorhinis. Tác nhân gây bệnh này tác động ảnh hưởng đến lợn, lây nhiễm vào những mô của chúng, nhưng trong trường hợp này không có phản ứng chéo với những prion đã được thử nghiệm .Cần nhiều nghiên cứu và điều tra hơn để làm sáng tỏ nhiều điều chưa biết về nó .
Tài liệu tham khảo
- Bastian F, Jennings R và Gardner W. 1987. Antiserum đối với phản ứng chéo protein fibril liên quan đến phế liệu với Spiroplasma mirum protein fibril. J. Lâm sàng. Microbiol. 25: 2430-2431.
- Daza C, Guillen J, King J, Ruiz V. Đánh giá phương pháp chiết tách và tinh lọc DNA từ mô cơ cố định trong formaldehyd từ xác chết không xác định. Tạp chí Med, 2014; 22 (1): 42-49,
- Butler G, Kotani H, Kong L, Frick M, Evancho S, Stanbridge E, và Mcgarrity G. Nhận dạng và đặc tính của các protein kháng K proteinase trong các thành viên của động vật thân mềm. Nhiễm trùng và miễn dịch, 1991, 59 (3): 1037-1042
- López M, Rivera M, Viettri M, Lares M, Morocoima A, Herrera L, et al. So sánh hai giao thức trích xuất DNA từ Trypanosoma cruzi trồng trong môi trường axen. Mục sư Peru. Trung tâm y tế công cộng 2014; 31 (2): 222-227. Có sẵn tại: scielo.org
- Jiménez G, Villalobos M, Jiménez E và Palma W. Xác định hiệu quả của năm giao thức trích xuất DNA từ vật liệu parafin cho các nghiên cứu phân tử. Rev Méd Univ Costa Rica. 2007; 1 (1): 10-19.
Các câu hỏi về proteinase k là gì
Nếu có bắt kỳ câu hỏi thắc mắt nào vê proteinase k là gì hãy cho chúng mình biết nhé, mõi thắt mắt hay góp ý của các bạn sẽ giúp mình cải thiện hơn trong các bài sau nhé <3 Bài viết proteinase k là gì ! được mình và team xem xét cũng như tổng hợp từ nhiều nguồn. Nếu thấy bài viết proteinase k là gì Cực hay ! Hay thì hãy ủng hộ team Like hoặc share. Nếu thấy bài viết proteinase k là gì rât hay ! chưa hay, hoặc cần bổ sung. Bạn góp ý giúp mình nhé!!
Các Hình Ảnh Về proteinase k là gì
Các hình ảnh về proteinase k là gì đang được chúng mình Cập nhập. Nếu các bạn mong muốn đóng góp, Hãy gửi mail về hộp thư [email protected] Nếu có bất kỳ đóng góp hay liên hệ. Hãy Mail ngay cho tụi mình nhé
Tham khảo thêm dữ liệu, về proteinase k là gì tại WikiPedia
Bạn hãy tìm thêm nội dung chi tiết về proteinase k là gì từ trang Wikipedia.◄ Tham Gia Cộng Đồng Tại💝 Nguồn Tin tại: https://cctechvietnam.vn/hoi-dap/
💝 Xem Thêm Chủ Đề Liên Quan tại : https://cctechvietnam.vn/hoi-dap/